G.D.A. Tesis

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Examinando G.D.A. Tesis por Autor "Badillo Viloria, María Auxiliadora"

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    Estudio molecular de especies de Borrelia y Coxiella en garrapatas Ixodidae del departamento del Atlántico
    (Universidad de Córdoba, 2024-01-30) Rosa Jaramillo, Steffania De la; López Mejia, Yesica; Badillo Viloria, María Auxiliadora; Contreras Cogollo, Verónica; Miranda, Jorge
    Las garrapatas son ectoparásitos hematófagos que infestan a la mayoría de los vertebrados. Clasificadas en tres familias: Argasidae (garrapatas blandas), Ixodidae (garrapatas duras). Algunas especies de la familia Ixodidae son vectores de diversos patógenos, siendo una preocupación para la salud humana y animal. Dentro de las principales bacterias zoonóticas transmitidas por garrapatas se encuentras especies de Borrelia sp, Coxiella sp., Rickettsia rickettsii, Anaplasma phagocitophylum, Ehrlichia chaffeensis, entre otras. En Colombia se han identificado 58 especies de garrapatas; 43 de la familia Ixodidae) entre las que se resaltan Rhipicephalus microplus, Rhipicephalus sanguineus, Amblyomma complejo cajennense, Amblyomma dissimile, Dermacentor nitens, entre otros. El conocimiento sobre las especies de Borrelia y Coxiella que circulan en garrapatas duras en el departamento del Atlántico, es crucial, para evaluar el riesgo de infecciones e identificar nuevas especies. Objetivo. Estudiar la distribución molecular de especies de Borrelia y Coxiella en garrapatas Ixodidae recolectadas de animales domésticos, silvestres y de vida libre en el departamento del Atlántico, Colombia. Materiales y métodos. Se realizó un estudio de corte transversal descriptivo a partir de 3045 garrapatas. Las muestras fueron recolectadas entre enero de 2021 a noviembre de 2022 en 18 municipios de las cinco subregiones del departamento del Atlántico, Colombia. Las garrapatas se identificaron a nivel de especie mediante claves morfológicas y se agruparon en 509 grupos. Los grupos de garrapatas se maceraron y se empleó 200μl del macerado para la extracción. La extracción de ADN se llevó a cabo utilizando el kit comercial GeneJET Genomic DNA Purification Kit (Thermo Scientific, Waltham, Massachusetts, EE. UU). Todos los grupos se analizaron para detectar la presencia de Borrelia spp. y Coxiella sp. mediante una Reacción en Cadena de la Polimerasa en tiempo real (qPCR) utilizando cebadores forward Bor16S3F y reverse Bor16S3R y una sonda Probe Bor16S3P dirigidos al gen 16S rRNA para especies de Borrelia y cebadores forward Trans-1F e reverse Trans-2R y una sonda Probe Coxiella sp. TM ([6FAM]) dirigidos a la secuencia de inserción IS1111 para Coxiella. Las muestras con punto de corte Cq <33 se sometieron a PCR anidadas y convencionales semianidadas para amplificar fragmentos de los genes 16S rRNA y flaB para Borrelia sp. Los fragmentos de secuencias se ensamblaron empleando el software MEGAX y los análisis filogenéticos se realizaron con IQ-TREE2 version 2.2.2.6. Resultados. Las garrapatas fueron identificadas morfológicamente como Amblyomma dissimile (5,02%), Amblyomma patinoi (0,39%), Amblyomma sp. (0,09%), Dermacentor nitens (35,9 %), Rhipicephalus microplus (51,2%), Rhipicephalus sanguineus sensu lato (7,4%). Se confirmó la identidad de Amblyomma patinoi en el departamento del Atlántico. Un total de 38 grupos (7,5%; IC95% 5.3-10.1; p= <0,001) analizados resultaron positivos para Borrelia sp. Los grupos analizados para la secuencia de inserción IS1111 de Coxiella sp. ninguno resultó positivo. El análisis BlastN de los fragmentos de los genes 16S rRNA y flaB mostro que las secuencias compartían similitud entre un 98,87 y 100% con Borrelia theileri y del 99.52% con Borrelia sp. depositada en GenBank. Los análisis filogenéticos por el método de máxima verosimilitud del gen 16S rRNA mostraron que la mayoría de las secuencias de Borrelia spp. se agrupaban a con secuencia de Borrelia theileri, y una secuencia de Borrelia sp. detectada en Amblyomma dissimile se agrupaba al clado de Borrelia asociado a reptiles (REP). Conclusiones: Los resultados filogenéticos muestran la distribución geográfica de B. theileri y Borrelia sp. asociada a reptiles recolectadas de animales domésticos, vida silvestre y garrapatas de vida libre en las cinco subregiones del departamento. La frecuencia de Borrelia theileri y su distribución en las cinco subregiones del departamento del Atlántico, sugiriendo que existe un riesgo potencial de borreliosis animal en estas áreas. Estos hallazgos son el primer informe sobre la presencia de Borrelia sp. en Amblyomma dissimile de garrapatas de reptiles en Colombia que se suman a la distribución geográfica de Borrelia spp. a América.