Santafé Patiño, GilmarContreras Martínez, Orfa Inés2024-01-292024-01-292024-01-26https://repositorio.unicordoba.edu.co/handle/ucordoba/8132Actualmente, la incidencia de Infecciones Asociadas a la Atención en Salud (IAAS) representa un grave problema por el aumento, no solo de los índices de morbilidad y mortalidad, sino también los costos en los servicios de salud a nivel global. Los hongos son uno de los principales agentes etiológicos de estas infecciones; infectan a un gran número de personas cada año aumentando las tasas de morbi-mortalidad especialmente en personas inmunocomprometidas. Recientemente se ha reportado la eficacia de compuestos de origen vegetal con potencial antifúngico como una alternativa a ser empleada. Por esto, el objetivo de esta investigación fue evaluar el potencial antimicrobiano del isoespintanol (ISO), tomando como modelo la levadura patógena Candida tropicalis, estimar su capacidad para inhibir biopelículas y hacer una exploración a los mecanismos de acción antifúngica de este compuesto. Los resultados revelaron inhibición del crecimiento fúngico e inhibición de biopalículas, con efectos superiores al efecto causado por la anfotericina B (AFB). Además, se evidenció el efecto del ISO sobre varias dianas moleculares como mecanismo de acción antifúngica. En cuanto al efecto del ISO, sobre el transcriptoma de C. tropicalis, el análisis de expresión génica diferencial permitió una visión integral de los cambios fisiológicos, estructurales y metabólicos de C. tropicalis que ocurren en presencia de ISO. Esta investigación resalta que la actividad antifúngica de ISO es un proceso complejo que involucra múltiples objetivos de acción.RESUMEN 3ABSTRACT 5CAPITULO 1. INTRODUCCIÓN 71.1. Problema y Justificación 71.2. OBJETIVOS 101.2.1. Objetivo general 101.2.2. Objetivos específicos 10CAPITULO 2. MARCO TEÓRICO 112.1. Bases teóricas 112.1.1. Infecciones Asociadas a la Atención en Salud (IAAS)2.1.2. Infecciones por Candida spp.2.1.3. Candida tropicalis2.1.4. Factores de virulencia en Candida tropicalis2.1.5. Mecanismos de resistencia2.1.6. La familia Annonaceae2.1.7. El género Oxandra2.1.8. Oxandra xylopioides Diels2.1.9. Metabolitos secundarios2.1.10. Isoespintanol 172.2. Antecedentes 19CAPITULO 3. METODOLOGÍA 213.1. Aislamiento, Purificación, e Identificación del Isoespintanol 213.2. Ensayos de citotoxicidad del isoespintanol 213.2.1. Cultivo celular 223.2.2. Ensayo de MTT 223.2.3. Ensayo de viabilidad con CV 223.3. Sensibilidad de bacterias y levaduras del género Candida frente al isoespintanol. 233.3.1. Sensibilidad de bacterias frente al ISO 243.3.2. Sensibilidad de levaduras del género Candida frente al ISO 253.4. Filogenómica de Candida tropicalis 263.4.1. Extracción de ADN genómico 263.4.2. Secuenciación genómica de C. tropicalis WGS (Whole genome shotgun) 273.5. Ensayos de sensibilidad antifúngica de C. tropicalis 273.5.1. Ensayo de reducción de MTT 273.5.2. Curva de inhibición del crecimiento fúngico 283.6. Exploración de mecanismos de acción antifúngico del isoespintanol contra C. tropicalis mediante su acción sobre diferentes dianas 283.6.1. Efecto del ISO sobre la membrana celular fúngica 283.6.1.1. Ensayos con citometría de flujo empleando Ioduro de propidio (IP) 283.6.1.2. Pérdida de material intracelular a través de la membrana celular 293.6.1.3. Medida de pH extracelular 293.6.1.4. Ensayos LIVE/DEAD 303.6.1.5. Tinción con azul de Evans 303.6.1.6. Determinación del contenido de ergosterol 303.6.2. Efecto del ISO sobre la morfología e integridad de las células 313.6.3. Efecto del ISO sobre la producción de especies reactivas de oxígeno intracelular (EROi) 323.6.4. Efecto del ISO sobre el potencial de membrana mitocondrial (ΔΨm) 323.6.5. Efecto del ISO sobre biopelículas fúngicas 333.6.6. Efecto del ISO sobre la integridad de la pared celular 343.7. Efecto del ISO sobre el transcriptoma de C. tropicalis 353.7.1. Secuenciación de ARN y datos de recuentos de lectura. 353.7.2. Análisis bioinformático 35CAPITULO 4. RESULTADOS Y DISCUSIÓN 37CAPITULO 5. CONCLUSIONES 38Referencias 39Anexos 50application/pdfspaCopyright Universidad de Córdoba, 2024Trabajo de grado - DoctoradoAtribución-NoComercial-SinDerivadas 4.0 Internacional (CC BY-NC-ND 4.0)info:eu-repo/semantics/openAccessOxandra xylopioidesIsoespintanolPotencial antifúngicoOxandra xylopioidesIsoespintanolAntifungal potentialUniversidad de CórdobaRepositorio Universidad de Córdobahttps://repositorio.unicordoba.edu.co/http://purl.org/coar/access_right/c_abf2